Projeto de Mestrado



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Projeto de Mestrado I
Hugo Leonardo Duarte

Rafaela Cabral G. Fabiano (iniciação científica)


Título:
Papel dos macrófagos na proliferação e função de neurônios sensoriais do gânglio da raiz dorsal (n-DRG) espinhal.

Introdução:
Os macrófagos estão presentes em mecanismos de reparo, regeneração e neuropatias nos sistemas nervoso central e periférico. Vários estudos descreveram a presença destas células nos gânglios da raiz dorsal espinhal (DRG-dorsal root ganglion), estrutura envolvida com a nocicepção em vertebrados. Assim, devido a estas habilidades em modificar populações celulares in vivo, torna-se fundamental a identificação e a caracterização dos eventos neuroquímicos e eletrofisiológicos em células neuronais (n-DRG) in vitro em contato com o produto derivado de macrófagos.

Objetivos:
Verificar a sobrevivência, a síntese de proteínas e os registros eletrofisiológicos de neurônios cultivados em meio condicionado de macrófagos derivados de monócitos do sangue ativados em cultura com nervo periférico.

Justificativa:
Este estudo simula in vitro o ambiente químico verificado em algumas neuropatias e em lesões neurológicas do SNP o que possui implicações clínicas importantes, uma vez que o entendimento dos processos de interação neurônio-macrófago poderia, por exemplo, explicar as modificações observadas no perfil de resposta neuronal de pacientes portadores de dor neuropática.

Materiais:


  • Isolamento e cultura de monócitos

DMEN;


Soro fetal bovino;

Glutamina;

Gentamicina*;

Ciprofloxacina*;

Penicilina;

Estreptomicina;

MCSF (fator estimulante de colônia de macrófago);

Placas de cultura;

Pipetas Pasteur de vidro.


  • Isolamento e cultura neuronal (DRG)

HBSS;


Colagenase;

Dispase;


DNAse;

DMEN;


Penicilina;

Estreptomicina;

Soro fetal bovino;

Poli-lisina;

Placas de cultura;

Pipetas Pasteur de vidro;

Lamínulas.


  • Registro eletrofisiológico

Solução interna;

Solução externa;

Solução Tyronde;




  • Western Blots

Membranas de nitrocelulose;

Anticorpos anti-MAP2 e anti-Tau;


  • Ensaio com MTT




Projeto de Mestrado II
Hugo Leonardo Duarte

Rafaela Cabral G. Fabiano (iniciação científica)



Título:
Inibição funcional do canal de Na+ resistente à tetrodotoxina (NAV-1.8) usando RNA de interferência.

Introdução:
O canal de Na+ resistente à tetrodotoxina (NAv-1.8) está envolvido na excitabilidade de neurônios do tipo C do gânglio da raiz dorsal (DRG). Este canal sofre modificações no seu perfil de expressão genética em diversas neuropatias, como na dor neuropática derivada de axotomia, HIV ou diabetes.

Diversos estudos, utilizando mutantes knock-out para NAv-1.8 e estratégias de Knock-down através de antisense RNA, causaram diferenças no padrão de excitabilidade dos neurônios do DRG. A técnica de RNA de interferência permite obter resultados de silenciamento melhores do que a Knock-down e de longa duração. Logo, este procedimento mostra-se promissor para melhor inferir sobre o papel do canal NAv-1.8 e proteínas associadas a ele no neurônio do tipo C.



Objetivo:

Verificar a excitabilidade do neurônio tipo C do DRG, após o silenciamento do canal NAv-1.8, através da técnica de RNA de interferência.

Analisar o padrão de expressão genético de proteínas associadas ao canal NAv-1.8 (subunidades β).

Materiais:


  • Isolamento e cultura neuronal (DRG)

HBSS;


Colagenase;

Dispase;


DNAse;

DMEN;


Penicilina;

Estreptomicina;

Soro fetal bovino;

Poli-lisina;

Placas de cultura;

Pipetas Pasteur de vidro;

Lamínulas.


  • Registro eletrofisiológico

Solução interna;

Solução externa;

Solução Tyronde;




  • Western Blots

Membranas de nitrocelulose;



Anticorpos anti-subunidades β;


  • Protocolo de RNAi



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