Rio Grande/RS, Brasil, 23 a 25 de outubro de 2013. Expressão de quimera contendo gnrh em



Baixar 1.29 Mb.
Página1/2
Encontro15.08.2019
Tamanho1.29 Mb.
  1   2




.

Rio Grande/RS, Brasil, 23 a 25 de outubro de 2013.



EXPRESSÃO DE QUIMERA CONTENDO GnRH EM Escherichia coli

ESLABÃO, Lívia Budziarek; SANTOS JUNIOR, Alceu Gonçalves; PIRAINE, Renan Eugênio Araujo; DA ROSA, Matheus Costa; ARAUJO, Itauá Leston

LEITE, Fábio Pereira Leivas

liviaeslabao@gmail.com
Evento: Congresso de Iniciação Científica

Área do conhecimento: Imunobiologia

Palavras-chave: hormônios, contraceptivo, quimera
1 INTRODUÇÃO
O uso de hormônios para a produção de vacinas imunocontraceptivas está sendo proposto como uma alternativa valiosa que satisfaz a maioria, senão todas, propriedades de um contraceptivo ideal. Por apresentarem alta especificidade ao alvo de interesse, ação de longa duração, baixo custo, e poucos efeitos colaterais, o desenvolvimento de vacinas imunocontraceptivas é realmente um grande avanço no campo da contracepção (Naz, 2011). O objetivo do nosso trabalho foi a clonagem e expressão, em Escherichia coli, do Hormônio Liberador de Gonadotrofina (GnRH) fusionado a uma molécula carreadora.

2 MATERIAIS E MÉTODOS
A quimera foi sintetizada pela empresa Epoch Biolabs, Inc. (USA) para clonagem foram utilizados iniciadores que amplificam e direcionam a inserção no plasmídeo pAE. O produto da PCR e o vetor foram submetidos a digestão com as enzimas de restrição EcoRI e HindIII (BioLabs) e, logo após, a ligação foi efetuada com a enzima T4 DNA Ligase (Invitrogen). O produto da ligação foi utilizado na transformação da cepa E. coli TOP 10. A seleção dos possíveis clones recombinantes foi efetuada através da técnica de MicroPrep. (Sambrock e Russel, 2001)

Os clones foram confirmados pela técnica da reação em cadeia da polimerase, PCR, posteriormente sequenciados pela empresa ACTGene Análises Moleculares Ltda. O clone 9 contendo a quimera, foi transformado em E. coli BL21 StarTM (DE3) onde expressou a proteína recombinante de aproximadamente 21kDa, massa molecular estimada quando comparada com marcador Prestained Standards Low Range. A caracterização da quimera foi efetuada através da técnica de Western Blot realizado com MAb anti-6xHis (Figura 1), já que o vetor pAE adiciona 6x histidinas as proteínas expressas.


3 RESULTADOS e DISCUSSÃO
A eletroforese em gel de poliacrilamida sugere a expressão da quimera (Figura 1) mostrando que houve uma expressão antes mesmo da indução com IPTG. Já a técnica de Western Blot confirmou a presença da mesma proteína (Figura 2). No presente estudo, a cepa E. coli BL21 StarTM (DE3) expressou a quimera recombinante contendo o GnRH, confirmando sucesso na construção da quimera.

1 2 M



Figura 1 – Imagem do resultado observado na técnica de SDS-PAGE da expressão da quimera recombinante. 1) Amostra do cultivo antes da expressão da quimera; 2) Amostra do cultivo após a expressão da quimera; M) Marcador Prestained SDS-PAGE Standards Low Range (Bio-Rad).




Compartilhe com seus amigos:
  1   2


©aneste.org 2020
enviar mensagem

    Página principal
Universidade federal
Prefeitura municipal
santa catarina
universidade federal
terapia intensiva
Excelentíssimo senhor
minas gerais
Universidade estadual
união acórdãos
prefeitura municipal
pregão presencial
reunião ordinária
educaçÃo universidade
público federal
outras providências
ensino superior
ensino fundamental
federal rural
Palavras chave
Colégio pedro
ministério público
senhor doutor
Dispõe sobre
Serviço público
Ministério público
língua portuguesa
Relatório técnico
conselho nacional
técnico científico
Concurso público
educaçÃo física
pregão eletrônico
consentimento informado
recursos humanos
ensino médio
concurso público
Curriculum vitae
Atividade física
sujeito passivo
ciências biológicas
científico período
Sociedade brasileira
desenvolvimento rural
catarina centro
física adaptada
Conselho nacional
espírito santo
direitos humanos
Memorial descritivo
conselho municipal
campina grande